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sP-selectin,进口大鼠可溶性P选择素elisa试剂盒
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主要产品:
sP-selectin,进口大鼠可溶性P选择素elisa试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠可溶性P选择素(sP-selectin)的含量。
  sP-selectin,进口大鼠可溶性P选择素elisa试剂盒的详细资料:

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠可溶性P选择素sP-selectin)的含量。

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠可溶性P选择素(sP-selectin)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠可溶性P选择素(sP-selectin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 

 

sP-selectin,进口大鼠可溶性P选择素elisa试剂盒安全性

1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

sP-selectin,进口大鼠可溶性P选择素elisa试剂盒操作注意事项

1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加   样器。

5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手   接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8)加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4)组织匀浆-----将组织加入适量shengli盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1)标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

2)洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。 每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物 素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3   次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9)在450nm波长处测定各孔的OD值。

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。

1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断与分析

1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的待测物质标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。


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