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ADAMTSs,BIM大鼠聚蛋白多糖酶elisa试剂盒厂家
品牌名称:
主要产品:
ADAMTSs,BIM大鼠聚蛋白多糖酶elisa试剂盒厂家用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠聚蛋白多糖酶(ADAMTSs)的含量。
  ADAMTSs,BIM大鼠聚蛋白多糖酶elisa试剂盒厂家的详细资料:

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠聚蛋白多糖酶ADAMTSs)的含量。

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠聚蛋白多糖酶(ADAMTSs)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠聚蛋白多糖酶(ADAMTSs)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 

二.ADAMTSs,BIM大鼠聚蛋白多糖酶elisa试剂盒厂家实验材料与试剂配制

1.仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液备用。

三.ADAMTSs,BIM大鼠聚蛋白多糖酶elisa试剂盒厂家样品收集、处理及保存

1).细胞培养上清:

适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。

2)细胞:

用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。

3)血清:

在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。

4)血浆:

应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。

5)体液:

包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。

6.)组织标本:

切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。

样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

7)保存:

如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

四.操作步骤

1)取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

2)分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。

3)标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。

注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

4)加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

5)温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

6)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。

7)加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

8)温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

9)洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。

10)显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

11)终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

12)读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。

五.数据计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。

六.注意事项

1)实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。

2)加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。

3)孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。

4)建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。

5)建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。

七.保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃

2.有效期:6个月

八.订货说明

1)卖方确保所订产品与目录技术指标保持*;

2)为了确保买方产品在运输中的质量,对有特殊要求的低温产品予以湿冰运输。

3)收到货物后如出现质量问题,买方需在收到货物一个月内向卖方提出书面异议。买方逾期不提出异议,视为货物符合其要求,卖方不付任何责任。

4)出现质量以外的问题,如破损等,买方应在收货后一个周内提出。买方未按时提出异议,视为该产品合格。

本公司对所有售出的产品保证质量,并提供良好的售后服务,有关产品质量的投诉,请在收到货物的32天内以书面形式提出,并向我公司技术人员提供相应的材料,我们会及时派人解决。所有形式的赔偿或退换仅限于产品本身,不涉及其他间接内容。凡购买本公司任意款elisa试剂盒,均可享受免费代测服务,并提供技术指导。

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