2. 将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作 1：200 稀释（将５μｌ样品加稀 释液稀释到 1ml，混匀） ；
3. 取 100μl 已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板 内（质控和标准品至少需做两孔） ，A1 孔不加液体作为空白底色；
4. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；
5. 到时间后将孔被液体甩去，并用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗 一次；
6. 在每孔内加 100μl 酶结合物（需按比例稀释，除 A1 孔外） ，轻微混匀；
7. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；
8. 甩去孔内酶结合物，用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，轻微
9. 在每孔内加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混匀；
10. 37℃放置 15 分钟； ，轻微混匀；
11. 每孔加 50μl 1N 硫酸终止液（包括 A1 孔）
12. 在 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 处读取吸光度值（OD 值） （将酶标仪 A1 孔设定为空白孔） 。
二、 结果换算： 以标准样品的 OD 值为轴，标准样品的数值为 X 轴，在方格纸或计算机上作 出标准曲线，然后根据标本的 OD 值读数在标准曲线上读出相应的 IgG 抗体 浓度。
三、 结果判定： 阴性：抗体浓度≤20u/ml 为正常 阳性：抗体浓度＞20u/ml 为阳性。
