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操作流程:
1. 根据需要,将若干孔德条带放置在支架上;
2. 将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作 1:200 稀释(将5μl样品加稀 释液稀释到 1ml,混匀) ;
3. 取 100μl 已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板 内(质控和标准品至少需做两孔) ,A1 孔不加液体作为空白底色;
4. 在 37℃温箱中放置 30 分钟;
5. 到时间后将孔被液体甩去,并用 1X 洗涤液反复清洗 4 次,zui后用蒸馏水洗 一次;
6. 在每孔内加 100μl 酶结合物(需按比例稀释,除 A1 孔外) ,轻微混匀;
7. 在 37℃温箱中放置 30 分钟;
8. 甩去孔内酶结合物,用 1X 洗涤液反复清洗 4 次,zui后用蒸馏水洗一次; (包括 A1 孔也加) ,轻微
9. 在每孔内加 100μlTMB(使用前混合A液和B液) 混匀;
10. 37℃放置 15 分钟; ,轻微混匀;
11. 每孔加 50μl 1N 硫酸终止液(包括 A1 孔)
12. 在 15 分钟内,用酶标仪在 450nm 处读取吸光度值(OD 值) (将酶标仪 A1 孔设定为空白孔) 。
二、 结果换算: 以标准样品的 OD 值为轴,标准样品的数值为 X 轴,在方格纸或计算机上作 出标准曲线,然后根据标本的 OD 值读数在标准曲线上读出相应的 IgG 抗体 浓度。
三、 结果判定: 阴性:抗体浓度≤20u/ml 为正常 阳性:抗体浓度>20u/ml 为阳性。
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