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大鼠活化蛋白C试剂盒
品牌名称:
主要产品:
大鼠活化蛋白C试剂盒血清样本……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红。
  大鼠活化蛋白C试剂盒的详细资料:

大鼠活化蛋白C试剂盒操作步骤

1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60pg/ml

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

30pg/ml

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

15pg/ml

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

7.5pg/ml

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

3.75pg/ml

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3

8.         洗涤:操作同5

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

 10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 其他产品种属分类 

 ELISA试剂盒、 小鼠ELISA试剂盒、 大鼠ELISA试剂盒、 豚鼠ELISA试剂盒、 兔子ELISA试剂盒、犬ELISA试剂盒、 ELISA试剂盒、 ELISA试剂盒、 ELISA试剂盒、马ELISA试剂盒、马铃薯ELISA试剂盒、鱼ELISA试剂盒、鸡ELISA试剂盒、鸭ELISA试剂盒等ELISA检测试剂盒
大鼠活化蛋白C试剂盒组成: 

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

248

296

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

20倍浓缩洗涤液

20ml×1

30ml×1

2-8℃保存

常见的问题及解答

 问:抗原检测出的分子量比资料上的大,是怎么回事?

:a)抗原形成了二聚体。增多巯基乙醇量,煮沸变性时间延长,可以打开二聚体。b)蛋白本身的修饰如:糖基化,磷酸化等

:蛋白转移不到膜上,但胶上有,同时Marker 转上去了,为什么?

:可能是:a)样品浓度过低;b)转移时间不够,。

问:磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等?

:NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂,一般加。但是不加也可以,大部分时候是不用加的。

问:要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和western blot试验吗?做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗?

:①免疫组化可以用来进行定位,但是不能精确定量,而且有时会有假阳性,不易与背景区分;Western blot可以特异性检测某个蛋白质分子,进行定量,但是不能定位。

②两种实验的一抗有时候不能通用,公司的产品说明一般都会说明可以进行什么实验,在免疫组化时,是否适合石蜡切片或者冰冻切片。

问:做Western Blot时,提取蛋白后冻存(未加蛋白酶抑制剂),用的博士德的一抗,开始还有点痕迹,现在越来越差,上样量已加到120μg,换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因?蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗?

:怀疑是样品问题,可能是:1,样品不能反复冻融;2,样品未加蛋白酶抑制剂。同时,建议检查Western Blot过程,提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说,一般加PMSF就可以了,能多加几中种蛋白酶抑制剂。

问:细胞水平要做western blot,多少细胞提的蛋白够做western blot? 

:一般5×10^6就足够了

问:同一样品能同时提RNA又提蛋白么?这样对western blot有无影响? 

:能,没有问题。

问:同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗?

:当然可以,有的甚至可以同时测几十种样品。

问:如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白,操作需要注意什么?

:如果是膜蛋白和胞浆蛋白,所用的去垢剂要温和得多,这时加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

问:我的样品的蛋白含量很低,每微升不到1微克,但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上,就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在,只是颜色变淡了,有什么办法可以解决?

:你可以加大上样量,没有问题,还有转移时你可以用减少电流延长时间,加20%甲醇。

购我司“,人ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,提供免费代测,实验过程中有任何疑问都可以技术人员,我们将为您一一解答。

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