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劲马解析手工洗板法与自动洗板法的差别

发布时间: 2014-10-30  点击次数: 1313次

Elisa酶联免疫试剂盒试验中,洗板是非常重要的过程。酶联免疫试验(ELISA)洗涤过程虽不是一个反应过程,但却也决定着实验的成败⋯。ELISA就是通过洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的,通过洗涤以清除残留在微孔板中未能与固相抗原或抗体相结合的物质,以及在反应过程中的非特异性吸附于固相载体上的干扰物质。聚苯乙烯对蛋白质的吸附是普遍的,在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附,洗涤时又应将这些非特异性吸附的干扰物质洗涤掉。由于“ELISA检测试剂盒”具有的特异性,抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。那么ELISA检测试剂盒洗板方法有以下两点。在ELISA操作中,洗涤是非常关键的,应引起操作者的高度重视。

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
上海劲马生物以
Elisa酶联免疫试剂盒为例:
针对手工洗板进行解答.手工法按试剂说明书严格操作,稀释液用蒸馏水按1:20稀释浓缩洗液,适量置于脸盆之中。从37℃水浴温箱中拿出温浴到时的反应板,到洗涤池处,放开自来水约1 min,然后快速甩掉反应液,即用自来水冲洗数次,甩掉水并用干净的毛巾吸干,放人配好洗涤液的脸盆之中,浸泡5 min~10min,然后将反应板取出,甩掉洗涤液,再用自来水冲洗数次,用干净吸水的毛巾拍干(多次)反应板。加显色剂A、B后,振荡封板,放入37℃水浴温箱10 min,取出,加终止液,振荡,上酶标仪读板,观察结果。按感染性医疗废物处理洗涤池的液体及用过的洗涤液:加入健之素(500 mg/片),使其浓度达到2 500 mg/L,浸泡24 h,收集起来,交医疗废物处理公司处理。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等,洗板机法按试剂说明书严格操作,稀释液用蒸馏水按1:20稀释浓缩洗液,适量置于洗板机洗液瓶里。将反应到时的反应板取出,用洗板机洗板5次,每次浸泡1 min,取出,用干净的毛巾拍干(多次)反应板。加显色剂A、B后,振荡封板,放入37℃水浴温箱10 min,取出,加终止液,振荡,上酶标仪读板,观察结果。

1.2.3假阳性排除实际工作中,我们发现假阳性一般显色都较淡,即弱阳性;为了排除假阳性,将753例中18例弱阳性(酶标仪读数0.105<OD<0.511)的标本取出,观察标本的基本情况,看是否有纤维蛋白、红细胞、溶血等情况;并做相应处理后,重新离心5 min(2 500 Wmin),重做2次,分别测定,一次用手工洗板,一次用洗板机洗板,以排除是否因洗板差异造成的弱阳性。
1.2.4假阴性的排除753例标本检测中,每板都做双孔阴性对照和阳性对照,然后用两种方法洗板,结果两种洗板方法都未出现阳性对照阴性结果的现象,而阴性对照全部阴性。
1.3统计方法数据分析使用SPSS 11.5统计软件统计处理。

Elisa酶联免疫试剂盒针对手工洗板与自动洗板做出的结果比较

两种洗板方法HBsAg检测结果比较753例检测标本中,两种方法洗板以后,手工法阳性52例,洗板机法阳性53例,经r检验∥=0.01,P>0.05,两种洗板方法差异无显著性
根据上海劲马生物在
Elisa酶联免疫试剂盒检验当中,手工法洗板和洗板机洗板,没有本质上的差别,两种方法结果都可靠。但手工法简单、经济、、实用,值得规范、推广。

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