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选择实验抗体真的有那么难吗?

发布时间: 2017-03-09  点击次数: 602次

    抗体,是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。zui近有很多同学诉苦,不知道该如何选择抗体,其实只要掌握方法,选择抗体没有那么难。今天上海劲就为大家详细介绍下。

        
1. 一抗选择
(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息。
(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种,可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
(4)样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择zui合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
(5)单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2. 二抗选择
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
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