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洗涤在ELISA过程中决定着实验的成败

发布时间: 2016-07-05  点击次数: 977次

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。

小鼠ELISA试剂盒操作中,洗涤是zui主要的关键技术,操作时尤为注意:保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板後在吸水纸或毛巾(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干(若使用易掉渣的纸,纸屑会留在板孔中,由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。);  
上海劲马生物提醒大家注意各种试剂盒的洗液不要混用。
如果洗液需要稀释,应按要求稀释,所用的水电导率在1.5us/cm 之下,洗液如果结晶应待其融解後配制。室温温育的试剂,特别是温育时间比较短的实验操作的试剂,加样对数据的影响比较大。特别要注意加样问题。  

不好的操作原因:不会正确使用加样器;血清或血浆标本分离不好即进行加样;  
手工操作中,加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);  加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外;小鼠ELISA试剂盒解决办法:熟悉加样器的使用,在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确;试验前标本需缓慢升温至室温,若标本为血清,冻结血清融解後,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离或过滤,澄清後再检测;  
加样时应将所加物加在小鼠ELISA试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出;加样後及时放入孵箱;加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干;  
如果采用AT或其他全自动加样,选择小鼠ELISA试剂盒或其他後处理仪器加酶试剂;  
标本较多时,请分批操作。每次加样在两到三分钟内完成。加标本时三排一加。每次加完样进行计时; 
参考小鼠ELISA试剂盒#加样  
温 育:  
温育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;  
温育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。

 

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